Ingénieur d'études H/F- Caractérisation moléculaire des mécanismes de la Recombinaison Homologue (H/F)

Missions :
Contexte: L 'équipe de recherche travaille sur le mécanisme de recombinaison homologue (RH), en tant que voie de réparation des lésions de l'ADN (cassures et arrêts de réplication). Une dérégulation ou une déficience de la recombinaison homologue peut entrainer la cancérogenèse mais en même temps, paradoxalement, la recombinaison homologue peut elle aussi être responsable d’une instabilité du genome, en promouvant des rarrangements par des mechanismes deviés de sa fonction principale.

Dans la RH, une serie d’étapes bien definies se deroulent de façon tres regulée: il y a d'abord la résection qui permet la formation de longs fragments d'ADN simple brin au niveau de la cassure ou de la fourche de réplication, puis l'assemblage des recombinases sur cet ADN simple brin pour permettre la recherche d'une séquence homologue pour recopier et réparer l'ADN endommagé. Il y a donc des échanges génétiques qui impliquent la formation d'intermédiaires avec des structures complexes. La reconstitution biochimique de certaines étapes de la RH permet la caracterisation fine de l’activité des acteurs d'intérêt sur l’ADN grace à l’observation par EM des complexes nucleoprotéiques et des intermediaires formés dans les réactions. Notre équipe de recherche est spécialisée dans cette observation et caractérisation de l'ADN et des complexes ADN-protéines. Pour cela nous avons développé un certain nombre de techniques de fabrication et d'observation des échantillons soit à partir d'ADN/ARN et protéines purifiés, soit par extraction de l'ADN à partir des cellules cultivées dans différents contextes.
Projet: Le candidat sera impliqué dans plusieurs projets de collaboration avec des chercheurs de l’Institut Curie (INCA principalement) ayant tous pour objectif la reconstitution des réactions d'invasion de brin et de formation de l’intermediaire D-loop, jusqu'à sa stabilisation et son extension par des polymerases, à l'aide de substrats ADN et de protéines purifiées. Il-elle apprendra à réaliser les échantillons pour leur observation en EM. Il-elle deviendra autonome pour manier le microscope et analyser les échantillons d'ADN. Enfin, il-elle mettra en place des outils d'analyse statistique pour identifier et caractériser les structures. L'objectif de la mission sera d'aller de la réalisation des réactions reconstitués de formation de la D-loop à leur observation et leur caractérisation en EM. Il est également possible que le-la candidat-e soit impliqué dans des projets d'analyse structurale de certains comples d'intérêt en cryo-EM.
Activités :
Purification d’ADN et de substrats d’ADN synthetiques. Purification de protéines et préparation de réactions biochimiques. Puis réalisation des échantillons pour la (cryo)microscopie électronique, adaptation des méthodes d'étalement, observation et analyse des molécules d'ADN.
Contexte de travail :
Environnement de travail:
Gustave Roussy est un institut de soins, de re
Voir plus sur le site emploi.cnrs.fr...