Offre de thése en Biologie/Biochimie H/F

Sujet de thèse :
La petite protéine G Arf6 est impliquée dans les mécanismes de transport intracellulaire et plus particulièrement dans les processus d’endocytose/recyclage des récepteurs membranaires (1). Elle joue également un rôle essentiel dans la mise en place de la polarité épithéliale, notamment dans l’assemblage des jonctions étroites et leur ancrage dans l’anneau d’acto-myosine (2). Mais les différents effecteurs et les mécanismes moléculaires impliqués dans ces processus sont encore mal connus.
La SUMOylation est une modification post-traductionnelle qui consiste en la conjugaison covalente, mais réversible, d’un polypeptide de 11-kDa nommé Small Ubiquitin like Modifier (SUMO) à des résidus lysine spécifiques de protéines substrats(3). D'un point de vue moléculaire, la SUMOylation peut moduler la dynamique des complexes multiprotéiques en empêchant l’interaction de la protéine modifiée avec ses partenaires-protéiques usuels ou en fournissant de nouveaux sites de liaison pour de nouvelles interactions. La SUMOylation est connue pour être impliquée dans les voies d'endocytose et dans l'architecture cellulaire(3) mais ici encore les mécanismes et les cibles demeurent mal caractérisés.
Après immuno-précipitation et analyse en spectrométrie de masse, nous avons découvert, en étroite collaboration avec l’équipe du Dr S. Martin (IPMC), que la protéine Arf6 était SUMOylée in vivo. Nous avons réussi à produire la protéine Arf6 in vitro dans un système procaryote et à la purifier sous sa forme SUMOylée. Nous pourrons ainsi en étudier les propriétés biochimiques. Enfin, nous avons identifiés deux lysines comme étant les sites majeurs de la SUMOylation. Ce qui nous permet de produire des mutants n’étant plus SUMOylables afin d’étudier les conséquences de l’absence de SUMOylation d’Arf6.
L’objectif du projet proposé est d’appréhender les conséquences fonctionnelles de la SUMOylation d’Arf6 à travers des études de biochimie et de biologie cellulaire.
1. D'Souza-Schorey, C., and Chavrier, P. (2006) ARF proteins: roles in membrane traffic and beyond. Nat Rev Mol Cell Biol 7, 347-358
2. Klein, S., Partisani, M., Franco, M., and Luton, F. (2008) EFA6 facilitates the assembly of the tight junction by coordinating an Arf6-dependent and -independent pathway. J Biol Chem 283, 30129-30138
3. Schorova, L., and Martin, S. (2016) Sumoylation in Synaptic Function and Dysfunction. Frontiers in synaptic neuroscience 8, 9


Contexte :
Le poste est financé par l'ANR. Le projet est dirigé par Michel Franco. Notre équipe appartient à l'Institut de Pharmacologie Moléculaire et Cellulaire (www.ipmc.cnrs.fr), institut de recherche publique mixte du CNRS, INSERM et de l'Université Côte d'Azur. L'Institut est situé à Sophia Antipolis, un parc technologique à proximité d'Antibes et Nice.
Profil du candidat :
Diplôme de master ou équivalent en : biologie ou biochimie, ingénierie.
Le poste se situe dans un secteur re
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