CDD Doctorant en biologie - Virologie (H/F)

Sujet de thèse :
Etude structurale et fonctionnelle de la glycoprotéine du virus de la maladie de Borna.

Les Bornaviridae appartiennent à l’ordre des Mononegavirales (virus à ARN simple brin de polarité négative et enveloppés). Le Borna disease virus (BDV-1), membre le plus étudié de cette famille, est un virus neurotrope responsable d’infections persistantes chez de nombreux vertébrés, incluant les rongeurs, les chevaux, et potentiellement l’humain. Ce virus possède à sa surface une unique glycoprotéine d’enveloppe, appelée glycoprotéine G (GP), qui joue un rôle central dans l’entrée virale. GP est le principal déterminant du tropisme cellulaire et tissulaire de BDV-1. Elle remplit deux fonctions clés au cours de l’entrée virale dans la cellule hôte : la reconnaissance et liaison au récepteur cellulaire et la fusion membranaire.

En effet, l’infection est initiée par la reconnaissance et la liaison à un récepteur cellulaire par GP, ce qui conduit à l’internalisation du virion par endocytose. Apres l’internalisation, l’acidification du compartiment endosomal déclenche un changement de conformation de GP, passant d’un état pré-fusion à un état post-fusion. Cette transition conformationnelle permet la fusion de la membrane virale avec la membrane endosomale, entraînant la libération du génome viral dans le cytoplasme, puis son transport vers le noyau pour la poursuite du cycle viral.
GP est une glycoprotéine de type I, synthétisée dans le réticulum endoplasmique et maturée dans l’appareil de Golgi. Malgré son rôle central dans l’infection, la structure tridimensionnelle de GP reste à ce jour inconnue, contrairement à celles de plusieurs autres Mononegavirales.
Par ailleurs, il n’est pas encore établi si, comme pour d’autres virus enveloppés, les fonctions de liaison au récepteur et de fusion membranaire de GP peuvent être dissociées.

Ce projet de thèse vise donc à caractériser fonctionnellement et structurellement la glycoprotéine GP de BDV-1. Plus précisément, il s’agira de résoudre la structure de GP sous différentes conformations (pré- et post-fusion) en utilisant la cryomicroscopie électronique (cryoEM) et/ou la cristallographie aux rayons X. Des résidus clef pour la fonction de GP seront ensuite identifiés et les glycoprotéines mutantes seront caractérisées fonctionnellement à l’aide de tests cellulaires (tests de fusion cellule/cellules et de pseudotypage de virus). Ensuite, la capacité de GP à lier différents récepteurs cellulaires proposés sera testée et la structure du complexe GP/récepteur sera étudiée par cryoEM et/ou cristallographie aux rayons X. L’analyse structurale permettra d’identifier des résidus clés impliqués dans la reconnaissance du récepteur qui seront ensuite testés fonctionnellement.

Dans l’ensemble, ce projet apportera des informations nouvelles sur les mécanismes moléculaires d’entrée des Bornavirus. Il s’appuie aussi sur l’expertise reconnue de l’équipe sur la r
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